Диагностические методы при ВИЧ-инфекции

Диагностика ВИЧ: методы и исследования

Ранняя диагностика заболеваний – залог успешного лечения. Ставшее крылатым выражение, особенно актуально для ВИЧ-инфекции. Ведь заболевание неизлечимо полностью, и только своевременная диагностика позволяет взять течение болезни под контроль и выбрать тактику лечения, чтобы жить полноценной жизнью.

Ранний срок диагностики ВИЧ – со 2 недели от предположительного заражения.

Ранний срок диагностики ВИЧ со 2 недели от предположительного заражения.

Когда нужно пройти диагностику на ВИЧ?

Несмотря на то что в последние годы ВИЧ диагностируют всё чаще, в особую группу риска попадают лишь некоторые люди.

  1. Медицинский персонал.
  2. Люди, ведущие беспорядочную сексуальную жизнь, и при этом забывают предохраняться.
  3. Наркоманы, принимающие наркотические вещества путём использования инъекций.
  4. Люди, которым переливалась донорская кровь (сегодня это скорее исключение, потому как доноров тщательно проверяют).

Кроме этого, заразиться может и ребёнок, находящийся в утробе матери, а также малыш, которого больная женщина будет кормить грудью.

Как уже говорилось, в наше время случайное заражение ВИЧ-инфекцией практически исключено. Это связано с одноразовым использованием в медицинских учреждениях шприцов, гинекологических зеркал, а также других подобных инструментов. Что касается доноров, то они сдают ряд анализов и только после этого допускаются к процедуре.

Все люди, которые входят в группу риска, обязаны регулярно приходить на диагностику на ВИЧ. Обследование рекомендуют пройти каждому, кто собирается вступать в брак или планирует завести ребёнка. Женщина, узнавшая о беременности, должна чуть ли не в первую очередь сдать анализ на вирус иммунодефицита человека.

Сегодня тест на ВИЧ есть возможность сдать анонимно. Сделать это можно в частной сертифицированной лаборатории, государственной лаборатории, кабинетах, специализирующихся на профилактике СПИДа.


  • Кроме этого, заразиться может и ребёнок, находящийся в утробе матери, а также малыш, которого больная женщина будет кормить грудью.

    Клиника заболевания: как себя проявляет ретровирус

    Основной способ передачи ВИЧ-заболевания:

    • половой контакт
    • от матери к ребенку (трансплацентарно, через родовой путь, грудное молоко)
    • в ходе процедуры переливания крови, трансплантации органа
    • при введении внутривенных наркотиков нестерильным шприцем

    Другими словами, до тех пор, пока нет контакта с кровью или жидкостями организма, вероятность инфицирования ВИЧ в повседневной жизни почти равна нулю.

    Количество вируса, содержащегося в секреторной жидкости, такой как слюна или слезы, очень мало. Даже если вирус находится в данных выделениях, то до сих пор не сообщалось о заражении при использовании общей ванны или полотенца.

    ВИЧ является достаточно «хрупким» вирусом, который инактивируется, как только он попадает из организма во внешнюю среду. Клинические проявления патологического процесса зависят от стадийности инфекции.

    Проведение лабораторных анализов является основным аспектом диагностирования ВИЧ-заболевания и назначения адекватной терапии.

    Подтверждающие тесты

    Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции включает проведение подтверждающего тестирования на наличие патогенных белковых сегментов. В этом случае применяется метод Western-blot (иммуноблоттинг).

    Антитела к вирусным белкам ВИЧ в сыворотке крови в норме отсутствуют. Анализ позволяет выявить в биологической жидкости обследуемого иммуноглобулины к сегментам: gp41, gp120, gp160, р24, p18, р17 и их мутациям. В соответствии с положением Российского Центра по Профилактике и Борьбе со СПИДом, обнаружение любых из перечисленных выше антител можно считать подтверждением диагноза.

    Если результат подтверждающего теста отрицателен, ВИЧ-статус обследуемого положительным не является.

    Существуют экспресс-тесты на вирус иммунодефицита человека, применяемые перед срочным хирургическим вмешательством.

    Анализы и инструментальные исследования при ВИЧ (СПИД)

    В отсутствие лабораторного заключения о результатах серологического исследования, а также если ВИЧ-инфицированный проходил обследование анонимно, серодиагностику ВИЧ-инфекции следует повторить. Для ВИЧ-инфицированных характерны анемия, лейкопения и тромбоцитопения: эти состояния, равно как и число лимфоцитов CD4, выявляет общий анализ крови с подсчетом лейкоцитарной формулы.

    Кроме того, проводят биохимический анализ крови (электролиты, показатели функции почек и печени), общий анализ мочи, определяют липидный профиль натощак (и ВИЧ, и антиретровирусная терапия нарушают обмен липопротеидов). В самом начале и далее ежегодно показаны нетрепонемные реакции на сифилис, например реакция преципитации инактивированной сыворотки с кардиолипиновым антигеном или реакция преципитации плазмы с кардиолипиновым антигеном, а также туберкулиновые пробы, в частности проба Манту.

    Результаты серологического исследования на IgG-антитела к Toxoplasma gondii позволяют судить о необходимости профилактики токсоплазмоза. Когда число лимфоцитов CD4 у серонегативного больного достигает отметки в 100 в мкл, исследование целесообразно повторить. И хотя диагностическая ценность его невелика, у серонегативных больных с объемным образованием ЦНС токсоплазмоз гораздо менее вероятен, чем у серопозитивных.

    Многие ВИЧ-инфицированные заражены вирусами гепатитов В и С, поэтому проводят исследование на HBsAg и антитела к HBcAg, HBsAg, вирусу гепатита С. Определяют также антитела к HAAg: если их нет, зараженным вирусом гепатита С больным показана вакцинация против гепатита А. Рекомендуется и серодиагностика цитомегаловирусной инфекции: серонегативным больным в дальнейшем переливают кровь только от серонегативных доноров, чтобы не допустить заражения цитомегаловирусом.

    Профилактику цитомегаловирусной инфекции у ВИЧ-инфицированных обычно не проводят, но серопозитивным больным при наступлении СПИДа она может потребоваться.

    ВИЧ-инфицированным, не болевшим ветряной оспой, определяют антитела к вирусу varicella-zoster. На основании результатов этого исследования судят о необходимости постэкспозиционной профилактики иммуноглобулином против вируса varicella-zoster.

    У ряда больных, особенно у негров и выходцев из средиземноморских стран, требуется исключить недостаточность Г-6-ФД, поскольку ВИЧ-инфицированным часто назначают такие провоцирующие гемолиз препараты, как дапсон, примахин и сульфаниламиды.

    Поскольку ВИЧ-инфицированные чрезвычайно подвержены легочным заболеваниям, проводят рентгенографию грудной клетки. Полученная рентгенограмма в дальнейшем будет служить отправной точкой. Кроме того, рентгенография позволяет выявить бессимптомный туберкулез.

    У ВИЧ-инфицированных женщин повышен риск воспалительных заболеваний матки и придатков, тубоовариального абсцесса, кандидозного вагинита, дисплазии и рака шейки матки. Поэтому с самого начала обязательно проводят цитологическое исследование мазков с шейки матки. Рекомендуется также исключить хламидийный и гонококковый цервицит. Целесообразность кольпоскопии остается спорной, показаниями к исследованию служат патологический мазок с шейки матки и наличие в анамнезе остроконечных кондилом. Если мазок нормальный, цитологическое исследование повторяют не реже одного раза в год, если мазок патологический – каждые полгода.

    После постановки диагноза ВИЧ-инфекции необходимо определить число лимфоцитов СD4, долю лимфоцитов CD4 и концентрацию вирусной РНК в плазме. По первым двум показателям судят о состоянии иммунной системы. На основании числа лимфоцитов CD4:

    1. определяют стадию ВИЧ-инфекции;
    2. определяют показания к антиретровирусной терапии и профилактике оппортунистических инфекций;
    3. оценивают риск сочетанных с ВИЧ-инфекцией заболеваний;
    4. диагностируют СПИД.

    И врач, и ВИЧ-инфицированный должны знать о разбросе результатов при определении числа лимфоцитов CD4.

    В большинстве лабораторий абсолютное число лимфоцитов CD4 получают путем умножения числа лейкоцитов на долю лимфоцитов среди лейкоцитов и на долю лимфоцитов CD4 среди общего числа лимфоцитов, поэтому изменение любого из сомножителей влияет на результат. Поскольку доля лимфоцитов CD4 не зависит от изменений числа лейкоцитов и доли лимфоцитов, это более стабильный и точный показатель состояния иммунной системы. При числе лимфоцитов CD4 200 в мкл доля лимфоцитов CD4 обычно составляет 14%, при числе 500 в мкл – 29%.

    Второй важный показатель состояния ВИЧ-инфицированного – концентрация вирусной РНК в плазме. Концентрация вирусной РНК и число лимфоцитов CD4 – взаимодополняющие показатели: первый отражает скорость репродукции вируса, второй – функцию иммунной системы.

    В настоящее время в США разрешены три метода измерения концентрации вирусной РНК:

    1. метод ПЦР с обратной транскрипцией (Roche Amplicor RT-PCR),
    2. метод разветвленной ДНК (Chiron bDNA),
    3. метод амплификации, основанной на нуклеотидной последовательности (NASBA; Огganon Teknika Nuclisens HIV-1 QT).

    Все три метода дают точные и воспроизводимые результаты. Методы ПЦР с обратной транскрипцией и амплификации, основанной на нуклеотидной последовательности, дают результаты, в два раза превышающие результаты метода разветвленной ДНК. Предел чувствительности всех методов составляет 40-50 копий вирусной мРНКв 1 мл плазмы. Исследование проводят дважды, с интервалом 1-2 нед, поскольку сопутствующие заболевания и даже вакцинация могут вызвать внезапный подъем концентрации вирусной РНК.

    Проф. Д. Нобель

    “Анализы и инструментальные исследования при ВИЧ (СПИД)” – статья из раздела Венерология

    Анализы и инструментальные исследования при ВИЧ СПИД.

    Качественный анализ на ВИЧ
    • Скрининговый — если антител в крови нет, то в ответе пишут: «Отрицательно». Если же антитела к ВИЧ обнаружены, проводится повторное исследование. В случае если и оно дало положительный результат, пробу исследуют методом иммуноблота.
    • Верификационный — если на тест-полоске обнаружены потемнения в местах локализации белков gp160, gp120, gp41, то ставят диагноз «ВИЧ». Другим вирусам соответствует свой набор белков.
      При этом важно учитывать, что метод иммуноблота позволяет точно установить наличие вируса лишь тогда, когда набор антител в крови является полным, а именно, если одновременно обнаружены белки: gp160, gp120, gp41 — то это однозначно трактуется как ВИЧ-инфекция. Но если хотя бы одного из перечисленных белков нет, например, отсутствует gp41, но есть gp160, gp120, то тест расценивается как сомнительный и требует повторного проведения.

    Интерпретировать результаты следует следующим образом.

    Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

    ВИЧ диагностика ПЦР – самый быстрый способ выявить заболевание. Ведь на кону годы полноценной счастливой жизни. Зачем терять свое время? Минус у этого анализа только один, и это цена. Некоторые слои населения не считают такое исследование доступным. Диагностика ВИЧ на ранних стадиях является проблемой, так как не сразу организм реагирует на присутствие вируса. Многие анализы в первые недели дают ложные результаты. Но ПЦР уже спустя 10 дней может ответить на вопрос, произошло заражение или нет. Правда, максимальной точности метод достигает только к 20 дню, что тоже является оперативной диагностикой инфекции.

    Читайте также:  Граммидин – инструкция по применению

    Принцип ПЦР довольно сложный, и отчасти поэтому стоит немалых денег. Это пример прямого анализа, при котором выявляется сам вирус, а не антитела к нему. Этот метод достоверной диагностики СПИДа считается наиболее совершенным, к тому же, дает возможность количественно анализировать вирус в организме.

    Технология показывает результат на основании активации особого гена в организме, что происходит только при репликации вируса иммунодефицита.

    Как происходит заражение

    Важно понимать, что ВИЧ-инфекция сегодня окружена большим количеством самых разнообразных мифов.

    Пациенты очень плохо информированы о том, в каких случаях можно заразиться, а когда здоровье находится вне опасности.

    Первое, что необходимо запомнить, это то, что ВИЧ отличается очень сильной неустойчивостью в окружающей среде. Это значит, что патогенный микроорганизм способен полноценно и длительно жить только в человеческом теле. Он не переносит нагревания свыше 50 градусов (умирает мгновенно). Также не способен противостоять процессам высыхания. Далеко не все жидкости организма содержат достаточное количество вируса для того, чтобы произошло заражение.

    Наибольшую опасность представляют:

    • кровь;
    • предэякулят;
    • сперма;
    • выделения из женского влагалища;
    • лимфа;
    • грудное молоко.

    Если любая из этих жидкостей контактирует со слизистыми оболочками, в которых есть микротравмы, или с пораженной травмами кожей, происходит заражение.

    Также оно возможно в том случае, если инородная жидкость попадает напрямую в кровоток. Слюна и слезы, вопреки распространенному мнению, угрозы не представляют. Из-за особенностей вируса и его низкой выживаемости передается он несколькими способами:

    • половой путь т.е. при незащищенных половых контактах, которые неминуемо влекут за собой соприкосновение биологических жидкостей и восприимчивых к патогену слизистых оболочек организма;
    • парентеральный путь т.е. перенос вируса с кровью при ее переливании или из-за использования нестерильного инструментария в медицинских целях;
    • вертикальный путь т.е. от матери к ребенку (сегодня если женщина принимает антиретровирусную терапию и отказывается от кормления грудью, вероятность заражения ребенка в родах сводится к минимуму).

    Важно понимать, что если для заражения через кожу микротравмы или открытые раны обязательны, то для заражения через слизистую это не обязательно условие. Объясняется разница тем, что слизистые оболочки и кожные покровы человеческого организма имеют совершенно разное строение. Эту разницу необходимо учитывать.

    Наибольшую опасность представляют.

    Диагностические методы при ВИЧ-инфекции

    1. Серологические методы обнаружения антител (АТ) к ВИЧ – стандарт при диагностике ВИЧ-инфекции (тест-системы ИФА на основе синтетических пептидов – обладают практически 100% чувствительностью и специфичностью). ИФА позволяет выявлять АГ ВИЧ, которые могут являться показателями раннего инфицирования или наоборот позднего – продвинутого развития ВИЧ-инфекции (р24 АГ)

    2. Подтверждающие тесты – иммуноблотинг (ИБ), непрямая иммунофлюоресценция (НИФ) и радиоиммунопреципитация (РИП).

    а) ВОЗ рекомендует считать положительной сыворотку, имеющую в ИБ антитела к двум оболочечным белкам и к одному из внутренних белков ВИЧ. Пациенты, положительные в ИФА, но имеющие неопределенные результаты в ИБ, должны быть обследованы клинически и оценены другими способами, медицинским обследованием, иммунологически и через 3 – 6 месяцев их сыворотку крови необходимо тестировать на антитела к ВИЧ.

    б) метод непрямой иммунофлюоресценции (НИФ) – применяют в качестве подтверждающего теста во многих лабораториях или как скрининговый тест.

    в) радиоиммунопреципитация – высоко чувствительный и специфичный метод, основанный на использовании меченых радиоактивными изотопами аминокислот. Метод высоко чувствительный для обнаружения антител к поверхностным белкам и поэтому высокоспецифичен, поскольку эти компоненты вируса присутствуют практически у всех ВИЧ-инфицированных после сероконверсии.

    3. Молекулярно-биологические методы: метод молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот, ПЦР

    1) как альтернативный и дополнительный подтверждающий метод детекции наличия вируса в организме по отношению к серологическим методам лабораторной диагностики;

    2) как первый метод специфического анализа при диагностике раннего ВИЧ-инфицирования, когда еще отсутствуют специфические противовирусные антитела;

    3) для диагностики ВИЧ-инфицированности новорожденных от ВИЧ-инфицированных матерей;

    4) для определения вирусной нагрузки и назначения специфической антиретровирусной терапии и контроля за её проведением;

    5) как уточняющий метод при неясных серологических результатах и при несовпадении серологических и культуральных анализов;

    6) при исследовании сексуальных партнеров ВИЧ-инфицированных лиц;

    7) как метод дифференциальной диагностики ВИЧ-1 и ВИЧ-2;

    4. Вирусологический метод.

    1. Принципы антиретровирусной терапии: лечение должно начинаться до развития существенного иммунодефицита; начальная терапия должна включать комбинации не менее, чем из трех препаратов; модификация терапии должна заключаться в замене или подключении не менее двух новых препаратов; крайне важно измерять уровень СД4+ клеток и вирусную нагрузку; снижение вирусной нагрузки до уровня, лежащего ниже предела определения чувствительных методик, отражает оптимальный эффект лечения.

    2. Выделяют три группы современных антиретровирусных препаратов:

    а) нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (НИОТ):зидовудин (азидотимидин, ретровир); диданозин (ddI, видекс); зальцитабин (ddC, хивид); ставудин (зерит, d4Т); ламивудин (3ТС, эпивир); абакавир; адефовир; комбивир (зидовудин+ абакавир); тризивир (зидовудин+ламивудин+абакавир); адефовир(нуклеотидный ингибиторы обратной транскриптазы).

    б) ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (ННИОТ):делавердин( рескриптор); невирапин(вирамун); ифавиренц.

    в) ингибиторы протеазы (ИП):саквинавир; ритонавир (норвир); индинавир (криксиван); нельфинавир (вирасепт); ампренавир (агенераза); лопинавир (алувиран); калетра(лопинавир+ритонавир).

    3. Монотерапия любым препаратом не может обеспечить достаточно выраженного и длительного подавления репликации ВИЧ. Более того, при монотерапии повышен риск появления резистентных штаммов и развития перекрестной устойчивости к препаратам той же группы. Единственным исключением является использование зидовудина в качестве монотерапии для снижения риска перинатальной передачи ВИЧ.

    4. Наиболее важным критерием эффективности терапии является динамика вирусной нагрузки, которую следует определять: без лечения – каждые 6-12 мес, на фоне лечения – каждые 3-6 мес, а также через 4-8 недель после начала противовирусной терапии.

    Помимо антиретровирусной терапии необходима терапия присоединившихся вторично заболеваний.

    34.3 СПИД (клинические варианты, оппортунистические заболевания).

    Опортунистические заболевания – тяжелые, прогрессирующие болезни, которые развиваются на фоне нарастающей иммуносупрессии и не встречаются у человека с нормально функционирующей иммунной системой (СПИД-индикаторные заболевания).

    а) первая группа – это заболевания, которые присущи только тяжелому иммунодефициту (уровень СД4+

    Серологические методы обнаружения антител АТ к ВИЧ – стандарт при диагностике ВИЧ-инфекции тест-системы ИФА на основе синтетических пептидов – обладают практически 100 чувствительностью и специфичностью.

    Классификация

    В клиническом течении ВИЧ-инфекции различают 5 стадий: инкубации, первичных проявлений, латентная, стадия вторичных заболеваний и терминальная. Стадия первичных проявлений может протекать бессимптомно, в виде первичной ВИЧ-инфекции, а также сочетаться с вторичными заболеваниями. Четвертая стадия в зависимости от тяжести подразделяется на периоды: 4А, 4Б, 4В. Периоды проходят фазы прогрессирования и ремиссии, различающиеся в зависимости от имеющей место противоретровирусной терапии или ее отсутствия.

    Четвертая стадия в зависимости от тяжести подразделяется на периоды 4А, 4Б, 4В.

    Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции

    … диагностика любого инфекционного заболевания основана на сопоставлении эпидемиологических, клинических и лабораторных данных, и преувеличение значения одной из групп этих данных может привести к диагностическим ошибкам.

    Клинические показания для обследования пациента на ВИЧ-инфекцию:
    •лихорадка более 1 месяца;
    •диарея более 1 месяца;
    •необъяснимая потеря массы тела на 10% и более;
    •затяжные, рецидивирующие или не поддающиеся стандартной терапии пневмонии;
    •постоянный кашель более 1 месяца;
    •затяжные рецидивирующие вирусные, бактериальные, паразитарные болезни;
    •сепсис;
    •увеличение лимфоузлов двух и более групп свыше 1 месяца;
    •подострый энцефалит;
    •слабоумие у ранее здоровых людей;
    •наличие СПИД-индикаторных болезней.

    Диагностика ВИЧ-инфекции включает в себя два этапа:
    I этап – установление собственно факта зараженности ВИЧ-инфекцией ;
    II этап – определение стадии заболевания .

    УСТАНОВЛЕНИЕ ФАКТА ЗАРАЖЕННОСТИ ВИЧ-ИНФЕКЦИЕЙ

    Читайте также:  Тег: стрептоцидовая мазь

    Установление собственно факта зараженности ВИЧ-инфекцией (то есть выявление ВИЧ-инфицированных) в свою очередь также включает в себя два этапа:
    I этапиммуноферментный анализ (ИФА) : метод ИФА является скрининговым (отборочным) – отбор предположительно инфицированных лиц, то есть его целью является выявление подозрительных лиц и отсеивние здоровых лиц; антитела к ВИЧ выявляют с помощью других антител к искомым антителам (антитела против других антител). Эти «вспомогательные» антитела метят ферментом. Все скрининговые тесты обязаны быть высокочувствительными, чтобы не пропустить больного. Из-за этого их специфичность не очень высокая, то есть ИФА может дать положительный ответ («вероятно болен») у неинфицированных людей (например, у больных аутоиммунными заболеваниями: ревматизм, системная красная волчанка и др.). Частота ложноположительных результатов при использовании различных тест-систем колеблется от 0,02 до 0,5%. Если у человека ИФА дало положительный результат, то для подтверждения факта инфицирования ВИЧ необходимо обследоваться дальше. При проведении ИФА в 3 – 5% случаев возможны ложноотрицательные результаты – если инфицирование произошло относительно недавно и уровень антител еще очень низкий, или в терминальной стадии болезни, характеризующейся тяжелым поражением иммунной системы с глубоким нарушением процесса антителообразования. Поэтому при наличии данных, свидетельствующих о контакте с инфицированными ВИЧ обычно проводят повторные исследования через 2 – 3 месяца.
    II этапиммуноблоттинг (в модификации Western Blot, вестерн-блот) : является более сложным методом и служит для подтверждения факта инфицирования. Этот метод выявляет не комплексные антитела к ВИЧ, а антитела к отдельным его структурным белкам (p24, gp120, gp41 и др.). Результаты иммуноблоттинга считаются положительными, если выявляются антитела хотя бы к трем белкам, один из которых кодируется генами env , другой – генами gag , третий – генами pol . Если обнаруживаются антитела к одному или двум белкам, результат считается сомнительным и требует подтверждения. В большинстве лабораторий диагноз ВИЧ-инфекции ставится, если одновременно выявляются антитела к белкам р24 , р31 , gp4l и gpl20/gp160. Суть метода: вирус разрушают на компоненты (антигены), которые состоят из ионизированных аминокислотных остатков, а потому все компоненты имеют отличающийся друг от друга заря; затем с помощью электрофореза (электрического тока) антигены распределяются на поверхности полоски – если в исследуемой сыворотке есть антитела к ВИЧ, то они будут взаимодействовать со всеми группами антигенов, а это можно выявить.

    Следует помнить , что антитела к ВИЧ появляются у 90-95% инфицированных в течение 3-х месяцев после заражения, у 5-9% инфицированных антитела к ВИЧ появляются через 6 месяцев и у 0,5-1 % инфицированных антитела к ВИЧ появляются в более поздние сроки. В стадии СПИДа количество антител может снижаться, вплоть до полного исчезновения.

    В иммунологии существует такое понятие, как «серологическое окно» – период от инфицирования до появления такого количества антител, которое можно выявить. Для ВИЧ этот период обычно продолжается от 2 до 12 недель, в редких случаях дольше. В период «серологического окна» по анализам человек здоров, но на самом деле является зараженным ВИЧ. Установлено, что ДНК ВИЧ может находиться в геноме человека не менее трех лет без признаков активности и антитела к ВИЧ (маркеры ВИЧ-инфицирования) не появляются.

    В данный период («серологическое окно») выявить ВИЧ-инфицированного и даже через 1-2 недели после заражения возможно с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Это чрезвычайно чувствительный метод – теоретически можно выявить 1 ДНК на 10 мл среды. Суть метода заключается в следующем: с помощью полимеразной цепной реакции получают много копий нуклеиновой кислоты (вирус является нуклеиновой кислотой -ДНК или РНК – в белковой оболочке), которые потом выявляют с помощью меченых ферментов или изотопов, а также по характерному строению. ПЦР является дорогостоящим методом диагностики, поэтому при скрининге и в плановом порядке не используется.

    ОПРЕДЕЛЕНИЕ СТАДИИ ЗАБОЛЕВАНИЯ

    В основе развития СПИДа лежит , в первую очередь, разрушение Т-лимфоцитов-хелперов, маркируемых моноклональными антителами – кластерами дифференцировки – как CD4. В связи с этим проведение диагностики и наблюдение за прогрессированием заболевания невозможно без контроля субпопуляции Т-хелперов, который наиболее удобно осуществлять с помощью лазерного клеточного сортировщика.

    При слабо выраженной ВИЧ-инфекции количество Т-лимфоцитов – чрезвычайно вариабельный показатель. В целом, снижение числа клеток CD4 (абсолютное и относительное) обнаруживается у лиц, ВИЧ-инфицирование которых произошло не менее года назад. С другой стороны, на ранних стадиях инфекции нередко оказывается резко повышенным число Т-супрессоры (CD8) как в периферической крови, так и в увеличенных лимфоузлах.

    При выраженном СПИДе абсолютное большинство больных имеет сниженное общее число Т-лимфоцитов (менее 1000 в 1 мкл крови, в том числе лимфоцитов CD4 – менее чем 22 в 1 мкл, тогда как абсолютное значение содержания CD8 остаётся в пределах нормы). Соответственно, резко снижается соотношение CD4/ CD8. Ответ Т-лимфоцитов in vitro на стандартные антигены и митогены снижается в строгом соответствии с относительно сниженным числом CD4.

    Для поздних стадии СПИДа характерны общая лимфопения, нейтропения, тромбоцитопения (соответственно, снижение числа лимфоцитов, нейтрофилов и тромбоцитов), анемия. Эти изменения могут быть следствием центрального угнетения кроветворения за счёт поражения кроветворных органов вирусом, а также – аутоиммунного разрушения клеточных субпопуляции на периферии. Кроме того, для СПИДа характерно умеренное увеличение количества гамма-глобулинов с доминирующим увеличением содержания IgG. Больные с выраженными симптомами СПИДа нередко имеют повышенный уровень IgA. На некоторых стадиях заболевания существенно повышается уровень таких маркёров СПИДа, как 1-микроглобулин, кислотостабильный -интерферон, 1-тимозин. То же происходит с секрецией свободного неоптерина – метаболита макрофагов. Пока не представляется возможным оценить относительную значимость каждого из перечисленных тестов, число которых постоянно возрастает. Поэтому их следует рассматривать во взаимодействии с маркёрами ВИЧ-инфекции как иммуновирусологического, так и цитологического характера. Для клинического анализа крови характерны лейкопения, лимфопения (соответственно, снижение числа лейкоцитов и лимфоцитов).

    1 стадия – «стадия инкубации» – антитела к ВИЧ еще не выявляются; диагноз ВИЧ-инфекции на данной стадии ставится на основании эпидемиологических данных и лабораторно должен подтверждаться обнаружением в сыворотке крови пациента вируса иммунодефицита человека, его антигенов, нуклеиновых кислот ВИЧ;
    2 стадия – «стадия первичных проявлений» – в данном периоде уже имеется выработка антител:;
    2А стадия – «бессимптомная» – ВИЧ-инфекция проявляется только выработкой антител;
    2Б стадия – «острая ВИЧ-инфекция без вторичных заболеваний» – в крови больных могут обнаруживаться широкоплазменные лимфоциты – «мононуклеары» и часто отмечается транзиторное снижение уровня СD4-лимфоцитов (острая клиническая инфекция отмечается у 50-90% инфицированных лиц в первые 3 месяца после заражения; начало периода острой инфекции, как правило, опережает сероконверсию, т.е. появление антител к ВИЧ);
    2В стадия – «острая ВИЧ-инфекция с вторичными заболеваниями» – на фоне снижения уровня СD4-лимфоцитов и развившегося вследствие этого иммунодефицита появляются вторичные заболевания различной этиологии (ангина, бактериальная и пневмоцистная пневмония, кандидозы, герпетическия инфекция и др.);
    3 стадия – «латентная» – в ответ на прогрессирование иммунодефицита происходит модификация иммунного ответа в виде избыточного воспроизводства СD4-клеток с последующим постепенным снижением уровня СD4-лимфоцитов, в среднем со скоростью 0,05-0,07×109/л в год; в крови обнаруживаются антитела к ВИЧ;
    4 стадия – «стадия вторичных заболеваний» – истощение лимфоцитов популяции CD4, концентрация антител к вирусу значительно снижается (в зависимости от тяжести вторичных заболеваний выделяют стадии 4А, 4Б, 4В);
    5 стадия – «терминальная стадия» – типично снижение количества СD4-клеток ниже 0,05×109/л; концентрация антител к вирусу значительно снижается или антитела могут не определяться.

    Ответ Т-лимфоцитов in vitro на стандартные антигены и митогены снижается в строгом соответствии с относительно сниженным числом CD4.

    Классификация

    эмтрицитабин FTC 200 мг, капсула;.

    Иммунный блоттинг

    Диагноз ВИЧ может быть поставлен только после проведения данного исследования. Для осуществления данного обследования используется нитроцеллюлозная полоска с нанесенными на нее вирусными белками.

    Забор крови для ИБ осуществляется из вены. Если результат оказывается положительным, это действительно говорит о наличии в организме ВИЧ-инфекции.

    Иногда возможно появление ложноположительных результатов ПЦР-реакции, что обусловлено реакцией на антитела к иным инфекциям.

    Методы диагностики ВИЧ-инфекции

    В настоящее время новые диагностические технологии позволяют выявить этиологические и патогенетические причины многих заболеваний и коренным образом повлиять на результаты лечения. Пожалуй, наиболее впечатляющие результаты внедрения этих технологий в клиническую практику достигнуты в области иммунологии и диагностики инфекционных заболеваний.

    Тест-системы на основе иммуноферментного и иммунохемилюминесцентного анализа позволяют выявить антитела различных классов, что значительно повышает информативность методов клинической, аналитической чувствительности и специфичности для диагностики инфекционных заболеваний. Следует отметить, что наиболее значительные успехи в диагностике инфекций связаны с внедрением в лабораторную практику метода полимеразной цепной реакции, который считается «золотым стандартом» в диагностике и оценке эффективности проведенного лечения ряда инфекционных заболеваний.

    Читайте также:  Ледибон (ladybon) инструкция по применению

    Для исследования может быть использован различный биологический материал: сыворотка, плазма крови, соскоб, биоптат, плевральная или спинномозговая жидкость (СМЖ). В первую очередь, методы лабораторной диагностики инфекций направлены на выявление таких заболеваний, как вирусный гепатит В, С, D, цитомегаловирусная инфекция, инфекции, передающиеся половым путем (гонорейная, хламидийная, микоплазменная, уреаплазменная), туберкулез, ВИЧ-инфекция и др.

    ВИЧ-инфекция – заболевание, вызываемое вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), длительное время персистирующего в лимфоцитах, макрофагах, клетках нервной ткани, в результате чего развивается медленно прогрессирующее поражение иммунной и нервной систем организма, проявляющееся вторичными инфекциями, опухолями, подострым энцефалитом и другими патологическими изменениями.

    Возбудители инфекции – вирусы иммунодефицита человека 1-го и 2-го типов (ВИЧ-1, ВИЧ-2) – относятся к семейству ретровирусов, подсемейству медленных вирусов. Вирионы являются сферическими частицами диаметром 100–140 нм. Вирусная частица имеет наружную фосфолипидную оболочку, включающую гликопротеиды (структурные белки) с определенной молекулярной массой, измеряемой в килодальтонах. У ВИЧ-1 – это gpl60, gpl20, gp41. Внутренняя оболочка вируса, покрывающая ядро, также представлена белками с известной молекулярной массой – р17, р24, р55 (ВИЧ-2 содержит gpl40, gpl05, gp36, р16, р25, р55).

    В состав генома ВИЧ входит РНК и фермент обратная транскриптаза (ревертаза). Для того чтобы геном ретровируса соединился с геномом клетки хозяина, вначале с помощью ревертазы происходит синтез ДНК на матрице вирусной РНК. Затем ДНК провируса встраивается в геном клетки-хозяина. ВИЧ обладает выраженной антигенной изменчивостью, значительно превышающей таковую у вируса гриппа.

    В организме человека основной мишенью ВИЧ являются Т-лимфоциты, несущие на поверхности наибольшее количество СD4-рецепторов. После проникновения ВИЧ в клетку с помощью ревертазы по образцу своей РНК вирус синтезирует ДНК, которая встраивается в генетический аппарат клетки-хозяина (СD4-лимфоциты) и остается там пожизненно в состоянии провируса. Помимо Т-лимфоцитовхелперов поражаются макрофаги, В-лимфоциты, клетки нейроглии, слизистой оболочки кишечника и некоторые другие клетки. Причиной снижения количества Т-лимфоцитов (клетки CD4) является не только прямое цитопатическое действие вируса, но и их слияние с неинфицированными клетками. Наряду с поражением Т-лимфоцитов у больных с ВИЧ-инфекцией отмечается поликлональная активация B-лимфоцитов с увеличением синтеза иммуноглобулинов всех классов, особенно IgG и IgA, и последующим истощением этого отдела иммунной системы. Нарушение регуляции иммунных процессов проявляется также повышением уровня α-интерферона, β2-микроглобулина, снижением уровня IL-2. В результате нарушения функции иммунной системы, особенно при снижении числа Т- лимфоцитов (CD4) до 400 клеток в 1 мкл крови и менее, возникают условия для неконтролируемой репликации ВИЧ со значительным увеличением количества вирионов в различных средах организма. В результате поражения многих звеньев иммунной системы человек, зараженный ВИЧ, становится беззащитным перед возбудителями различных инфекций.

    На фоне нарастающей иммунодепрессии развиваются тяжелые прогрессирующие заболевания, которые не встречаются у человека с нормально функционирующей иммунной системой. Это заболевания, которые Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) определила как СПИД-маркерные или СПИД-индикаторные заболевания.

    СПИД-индикаторные заболевания

    Первая группа – заболевания, присущие только тяжелому иммунодефициту (уровень СD4 74 100 копий/мл почти у всех пациентов развивается клиническая картина СПИДа (Senior D., Holden Е., 1996).

    Вероятность развития СПИДа в 10,8 раз выше у лиц с содержанием ВИЧ-1 в крови >10 000 копий/мл, чем у лиц с содержанием ВИЧ-1 в крови 20 000 копий/мл (ПЦР). Оценка результатов антиретровирусной терапии у лиц, инфицированных ВИЧ, проводится по снижению уровня сывороточной РНК ВИЧ.

    При эффективном лечении уровень виремии должен снижаться в 10 раз в течение первых 8 недель и быть ниже предела чувствительности метода (ПЦР) (

    Вероятность развития СПИДа в 10,8 раз выше у лиц с содержанием ВИЧ-1 в крови 10 000 копий мл, чем у лиц с содержанием ВИЧ-1 в крови 20 000 копий мл ПЦР.

    Скрининговое обследование и диагностика ВИЧ-инфекции

    Решающее значение в постановке диагноза ВИЧ-инфекции играет лабораторная диагностика, которая заключается в обнаружении АТ к ВИЧ в крови методом ИФА с последующим подтверждением положительных результатов методом ИБ. Такой метод диагностики ВИЧ-инфекции позволяет выявлять ВИЧ-инфицированных лиц с эффективностью 99%.

    Показания к применению различных лабораторных исследований и особенности интерпретации результатов

    В настоящее время для скринингового этапа диагностики ВИЧ-инфекции используются наборы реагентов третьего и четвертого поколений, основанные на методе ИФА. Отличительной особенностью тестов четвертого поколения является возможность одновременного выявления АГ (p24) и суммарных АТ, в то время как тесты третьего поколения позволяют определять только АТ. По возможности, предпочтение должно отдаваться тестам четвертого поколения, ввиду их более высокой диагностической чувствительности и возможности выявления инфекции у лиц в период серологического окна.

    Отрицательный результат при выявлении АТ к ВИЧ методом ИФА не всегда свидетельствует об отсутствии заражения. Серьезную проблему представляют те случаи, когда тест проведен в период серологического окна, т.е. в первые недели после заражения, когда еще не выработались в достаточном количестве АТ к ВИЧ. У отдельных лиц период серологического окна может затянуться на несколько месяцев, поэтому при наличии данных, свидетельствующих о контакте с инфицированными ВИЧ, обычно проводят повторные исследования через 2–3 месяца. Ложноотрицательные результаты выявления АТ к ВИЧ при использовании ИФА могут быть получены в терминальной стадии болезни, характеризующейся тяжелым поражением иммунной системы с глубоким нарушением процесса образования АТ.

    Положительный результат выявления АТ методом ИФА указывает на вероятность заражения ВИЧ-инфекцией, но иногда этот результат может быть ложноположительным, например, при наличии у человека опухолей, аллергических заболеваний, во время беременности, при аутоиммунных заболеваниях, существенных изменениях показателей биохимического исследования крови, ряде хронических заболеваний. В таких случаях требуются дополнительные исследования в экспертной лаборатории.

    В случае получения положительного результата выявления АТ к ВИЧ методом ИФА требуется его подтверждение. На первом этапе подтверждения анализ повторяют в той же тест-системе в двух лунках — это позволяет исключить технические ошибки. Если результат подтвердился, определение АТ методом ИФА в сыворотке пациента повторяют, используя два референтных набора реагентов. Если хотя бы в одном из таких исследований получен положительный результат, предпринимают третью стадию подтверждения: исследование методом ИБ, который позволяет выявить АТ к отдельным белкам-антигенам ВИЧ.

    Результаты, полученные методом ИБ, интерпретируются как положительные, сомнительные и отрицательные. Отрицательными (негативными) считают результаты, если в исследуемой сыворотке не обнаружены АТ ни к одному из АГ ВИЧ или имеется слабая реакция с белком р17. Наиболее веским основанием для положительной реакции является обнаружение АТ к белкам оболочки ВИЧ (гликопротеидам gp41, gp120, gp160). Результат считается положительным в случае обнаружения АТ к каким-либо двум гликопротеидам ВИЧ. При наличии реакции только с одним из белков оболочки, в сочетании с реакцией с другими белками или без нее, результат считается сомнительным, в этом случае рекомендуется провести исследования для обнаружения АГ р24 или ДНК/РНК ВИЧ. Если выявлен АГ р24 или ДНК/РНК ВИЧ, повторное обследование с использованием ИБ проводится через 2 недели после получения первого неопределенного результата и в дальнейшем через каждые 2 недели до получения положительного результата в подтверждающем тесте. Если через 6 месяцев после первого обследования вновь будут получены неопределенные результаты, а у пациента не будут выявлены факторы риска заражения и клинические симптомы ВИЧ-инфекции, результат расценивается как ложноположительный.

    Нередко по прошествии 1–3–6 месяцев с момента получения сомнительного результата в сыворотке крови появляются одно за другим АТ ко всем АГ ВИЧ. В этом случае сомнительный результат – свидетельство начальной стадии ВИЧ-инфекции. В ряде случаев сомнительные результаты ИБ наблюдаются у неинфицированных лиц, в организме которых есть АТ, схожие с истинными АТ к ВИЧ.

    Одним из косвенных признаков ВИЧ-инфекции является избирательное уменьшение CD4+ Т-клеток хелперов в связи с тем, что ВИЧ обладает тропностью к клеточному рецептору CD4. Однако эти изменения могут отсутствовать на определенных стадиях ВИЧ-инфекции, иметь индивидуальные колебания у разных пациентов, а также встречаться при других заболеваниях. Так, у взрослых пациентов, находящихся в латентной стадии заболевания, количество CD4+ лимфоцитов обычно превышает 0,5 . 109/л, что соответствует значениям у здоровых людей.

    Однако эти изменения могут отсутствовать на определенных стадиях ВИЧ-инфекции, иметь индивидуальные колебания у разных пациентов, а также встречаться при других заболеваниях.

  • Добавить комментарий